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中药产业回暖,如何检测黄曲霉毒素成为一大关


前一阵,世卫组织证实:中医药可以有效治疗新冠一事,将中药又一次拉进大众视野。其实一直以来业界对于中医药都存在一定的争议,但是不能否认的是中药产业正在渐渐回暖。近期阿斯利康落户成都高新区中医药创新产业基地,也有人认为是阿斯利康又一次进军中医药所释放的一个信号。其实一直以来许多企业都在中国寻找中成药上的机会点。


 


中药材大多取自于自然界,那么广泛存在的真菌毒素就是不可避免的一个问题。



1真菌毒素污染是如何产生?


中药材从生产、采收、加工、运输、贮藏等过程中均有可能由于自身性质(内因)与外界因素(外因)综合作用进而引发真菌毒素污染的结果。内因是指中药材本身的营养物质(如水分、蛋白、糖类、油脂等)可以为霉菌的生长提供必需物质。外因是指因为人为处理不当,给霉菌提供了必要的生产环境,从而增加了真菌毒素污染的几率,这种现象在南方高温高湿地区尤为突出。


 


目前,2020版药典中规定了对于中药材中真菌毒素的规定检测方法和具体限量。并且,规定了以下中药材皆需要检测黄曲霉毒素,包含了:柏子仁、大枣、水蛭、地龙、肉豆蔻、全蝎、决明子、远志、陈皮、使君子、胖大海、莲子、桃仁、蜈蚣,槟榔、酸枣仁、薏苡仁、僵蚕、麦芽、延胡索、土鳖虫、九香虫、蜂房、马钱子,检测方法需照真菌毒素测定法(通则2351)测定。


限量要求:每1000g中药材含黄曲霉毒素B1不得超过5μg,黄曲霉毒素B1B2G1G2的总量不得超过10μg


黄曲霉毒素


黄曲霉毒素(Aflatoxins)CAS1402-68-2,是一组化学结构类似的化合物,黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素,B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物,即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素),前者为基本毒性结构后者与致癌有关。


1:食品中常见的黄曲霉毒素


目前共发现有20多种黄曲霉毒素,其中食品中常见且危害极大的有黄曲霉毒素B1B2G1G2四种。



2黄曲霉毒素对人体的危害


在上面所提到的四种黄曲霉毒素中,B1的毒性最强,是氰化钾的10倍,砒霜的68倍 。黄曲霉毒素B1的半数致死量为0.36 mg/kg。所谓半数致死量是指能够导致至少一半实验对象死亡所需要的药物剂量。一个身重50kg的正常人,摄入18mg黄曲霉毒素B1就毙命。


对健康的危害黄曲霉毒素进入体内后,主要在肝细胞内质网微粒体混合功能氧化酶系的作用下进行代谢。黄曲霉毒素没有经过代谢活化是无致癌性的,因曲昔曲霍毒素袖称为前致癌物.远远高于氰化物、砷化物和有机农药的毒性,其中以B1毒性最大。当人摄入量大时,可发生急性中毒,出现急性肝炎、出血性坏死、肝细胞脂肪变性和胆管增生。当微量持续摄入,可造成慢性中毒,生长障碍,引起纤维性病变,致使纤维组织增生。AFT的致癌力也居首位,是目前已知最强致癌物之一。



3如何用液相色谱检测黄曲霉毒素


可以用液相色谱检测中药材中的黄曲霉毒素B1B2G1G2,具体方法如下:


提取方法:

取供试品粉末约15g(过二号筛),精密称定,置于均质瓶中,加入氯化钠3g,精密加入70%甲醇溶液75ml,高速搅拌2分钟(搅拌速度大于10000r/min),离心5分钟(离心速度4000r/min),精密量取上清液15ml, 50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,离心10分钟(离心速4000r/min),精密量取上清液20ml


净化:

免疫亲和柱:

Romer黄曲霉毒素免疫亲和柱-3ml


上样:上样液用玻璃纤维滤纸过滤后通过免疫亲和柱,控制流速1ml/min


淋洗:用水20ml洗脱(必要时可以先用淋洗缓冲液10ml洗脱,再用水10m l洗脱),弃去洗脱液,使空气进入柱子,将水挤出柱子;


洗脱: 1.5ml甲醇洗脱并收集洗脱液,置2ml容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,等待上机;


色谱条件:

a)  流动相:甲醇:乙腈:水=35:10:58

c) 色谱柱

ZORBAX Eclipse Plus C18,4.6*150mm5um

d) 流速:1.0mL/min;

e) 柱温:40 ℃;

f) 进样量:50μL;

g) 光化学柱后衍生器; (配有254nm紫外灯)

h) 激发波长:360nm;发射波长:440nm;


参考色谱图:

 


4、相关产品订购指南